ਪੌਲੀਐਕਰੀਲਾਮਾਈਡ ਜੈੱਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਲਈ ਸਾਵਧਾਨੀਆਂ

· ਪੌਲੀਐਕਰੀਲਾਮਾਈਡਜੈੱਲ ਨੂੰ ਐਕਰੀਲਾਮਾਈਡ ਮੋਨੋਮਰ, ਪੋਲੀਮਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਸਮੱਗਰੀ, ਉਤਪ੍ਰੇਰਕ, ਅਤੇ ਨਮਕ ਅਤੇ ਬਫਰ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦੇ ਸੱਜੇ ਹਿੱਸੇ ਦੁਆਰਾ ਇਕੱਠਾ ਕਰਨਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।

· ਐਕਰੀਲਾਮਾਈਡਅਤੇ BIS (N, N '- ਮਿਥਾਈਲੀਨ ਡਬਲ ਐਕਰੀਲਾਮਾਈਡ) ਮੋਨੋਮਰ ਫਾਰਮ ਜੈੱਲ ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ ਹੈ।

· ਅਮੋਨੀਅਮ ਪਰਸਲਫੇਟ ਚਿਪਕਣ ਵਾਲੇ ਪੋਲੀਮਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਸ਼ੁਰੂ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਗੂੰਦ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ 10% ਅਮੋਨੀਅਮ ਪਰਸਲਫੇਟ ਘੋਲ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਜਾਣਕਾਰੀ ਸਰਗਰਮ ਵਰਤੋਂ ਦੀ ਜ਼ਰੂਰਤ ਦਰਸਾਉਂਦੀ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, 10% ਘੋਲ ਨੂੰ ਕਈ ਹਫ਼ਤਿਆਂ ਲਈ 4℃ 'ਤੇ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਨੁਕਸਾਨ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਰੱਖਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। 10 ਮਿ.ਲੀ. ਤੱਕ ਬਣਾਓ ਅਤੇ ਜਦੋਂ ਗੂੰਦ ਇਕੱਠਾ ਹੋਣ ਵਿੱਚ ਅਸਫਲ ਹੋ ਜਾਵੇ ਤਾਂ ਇਸਨੂੰ ਰੱਦ ਕਰੋ।

ਸੁਝਾਅ: ਦਾ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤਐਕਰੀਲਾਮਾਈਡਸੀਕੁਐਂਸਿੰਗ ਵਿੱਚ ਗੂੰਦ ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਗੂੰਦ ਇੱਕੋ ਜਿਹੇ ਨਹੀਂ ਹਨ। ਜੇਕਰ ਪਹਿਲਾਂ ਤੋਂ ਬਣੇ ਐਕਰੀਲਾਮਾਈਡ: BIS ਘੋਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰ ਰਹੇ ਹੋ, ਤਾਂ ਸਹੀ ਬੋਤਲ ਲੈਣਾ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਓ।

· TEMED (N, N, N ', N ' - ਟੈਟਰਾਮਿਥਾਈਲ ਐਥੀਲੀਨੇਡੀਆਮਾਈਨ) ਇੱਕ ਉਤਪ੍ਰੇਰਕ ਹੈ, ਇੱਕ ਭੂਰੇ ਰੰਗ ਦੀ ਬੋਤਲ ਵਿੱਚ, ਫਰਿੱਜ ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਗੂੰਦ ਪਾਉਣ ਤੋਂ ਠੀਕ ਪਹਿਲਾਂ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ।

· ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਵਿੱਚ ਵਰਤੇ ਗਏ ਪੋਲੀਐਕਰੀਲਾਮਾਈਡ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਗਲਾਸ ਨੂੰ ਹਰ ਵਾਰ ਪਹਿਲਾਂ ਅਤੇ ਬਾਅਦ ਵਿੱਚ ਧੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ। ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਗਰਮ ਸਾਬਣ ਵਾਲੇ ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ ਨਰਮ ਬੁਰਸ਼ ਅਤੇ ਕੱਪੜੇ ਨਾਲ ਧੋਵੋ, ਡਿਸਟਿਲਡ ਪਾਣੀ ਨਾਲ ਕੁਰਲੀ ਕਰੋ ਅਤੇ ਸੁੱਕਣ ਲਈ ਖੜ੍ਹੇ ਰਹੋ।

· ਨਮੀ ਅਤੇ ਧੂੜ ਖੋਖਲੇ ਪੋਲੀਮਰ ਨਾਲ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ। ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ, ਕੱਚ ਦੀ ਪਲੇਟ ਨੂੰ ਕੱਚ ਦੇ ਕਲੀਨਰ ਨਾਲ ਸਾਫ਼ ਕਰੋ ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ ਨਰਮ ਬੁਰਸ਼ ਨਾਲ ਪੂੰਝੋ। ਡਿਸਟਿਲਡ ਪਾਣੀ ਨਾਲ ਧੋਵੋ ਅਤੇ ਪੇਪਰ ਵਾਈਪ ਨਾਲ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਸੁਕਾਓ। ਕਾਗਜ਼ ਨਾਲ ਪੂੰਝਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ 70% ਈਥੇਨੌਲ ਨਾਲ ਕੁਰਲੀ ਕਰਨ ਨਾਲ ਸਾਫ਼ ਕਰਨ ਅਤੇ ਸੁਕਾਉਣ ਨੂੰ ਤੇਜ਼ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਮਿਲਦੀ ਹੈ। ਐਕਰੀਲਾਮਾਈਡ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਲਗਾਤਾਰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ: BIS, ਪਾਣੀ, ਬਫਰ ਘੋਲ, ਅਮੋਨੀਅਮ ਪਰਸਲਫੇਟ, TEMED। ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਹਿਲਾਓ ਅਤੇ ਤੁਰੰਤ ਡੋਲ੍ਹ ਦਿਓ।

ਪੋਲੀਮਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਪੌਲੀਐਕਰੀਲਾਮਾਈਡ ਨੂੰ ਡੀਗੈਸ ਕਰਨਾ ਜ਼ਰੂਰੀ ਨਹੀਂ ਹੈ। (ਐਕਰੀਲਾਮਾਈਡ ਨੂੰ ਬੁਲਬੁਲੇ ਹਟਾਉਣ ਲਈ ਵੈਕਿਊਮ ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਜਾਂਦਾ ਸੀ ਕਿਉਂਕਿ ਆਕਸੀਜਨ ਪੋਲੀਮਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ।)

ਖਿਤਿਜੀ ਗੂੰਦ ਬਿੰਦੂ ਨਮੂਨਾ ਸੁਝਾਅ।

· ਹੇਠਲੇ ਡੱਬੇ ਵਿੱਚ ਕਾਲੇ ਕਾਗਜ਼ ਦਾ ਇੱਕ ਟੁਕੜਾ ਰੱਖੋ, ਕਾਲੇ ਪਿਛੋਕੜ ਵਿੱਚ ਕੁਝ ਨਮੂਨਾ ਛੇਕ ਬਣਾਓ ਤਾਂ ਜੋ ਹੋਰ ਸਪਸ਼ਟ ਤੌਰ 'ਤੇ ਦੇਖਿਆ ਜਾ ਸਕੇ।
· ਕੋਲਾਇਡ ਦੇ ਬਿਲਕੁਲ ਉੱਪਰ, ਗੂੰਦ ਟੈਂਕ ਨਾਲ ਭਰਿਆ ਬਫਰ।
· ਜੇਕਰ ਕਿਨਾਰੇ 'ਤੇ ਰੌਸ਼ਨੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਲਾਈਟਾਂ ਚਾਲੂ ਕਰੋ, ਕੋਲਾਇਡ ਨੂੰ ਰੌਸ਼ਨੀ ਚਮਕਣ ਦਿਓ। ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਪਾਈਪੇਟ ਵਿੱਚ ਖਿੱਚੋ।
· ਆਟੋਮੈਟਿਕ ਪਾਈਪੇਟਿੰਗ ਡਿਵਾਈਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ।
· 10-200 mu ਵਿੱਚ 1 ਤਰਲ ਮੂਵਿੰਗ ਪੁਆਇੰਟ ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਬਿੰਦੂਆਂ ਵਿੱਚ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਬਹੁਤ ਛੋਟੇ ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਛੇਕ (10μ1 ਤੋਂ ਘੱਟ) ਲਈ, ਗੂੰਦ ਨੂੰ ਸੀਕਵੈਂਸ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਣ ਵਾਲਾ ਲੰਬਾ ਪਾਈਪੇਟ ਹੈੱਡ ਵਧੇਰੇ ਸੁਵਿਧਾਜਨਕ ਹੈ।

· ਪਾਈਪੇਟਿੰਗ ਸਿਰਫ਼ ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਡੁਬੋ ਕੇ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ, ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਚੱਲ ਰਹੇ ਤਰਲ ਨੂੰ ਸਾਹ ਰਾਹੀਂ ਅੰਦਰ ਖਿੱਚਣਾ। ਨਮੂਨਾ ਗਲਿਸਰੀਨ ਨਾਲ ਚਿਪਚਿਪਾ ਦਿਖਾਈ ਦੇ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਤੇਜ਼ ਪੰਪਿੰਗ ਪਾਈਪੇਟ ਦੇ ਸਿਰ ਵਿੱਚ ਹਵਾ ਦੇ ਬੁਲਬੁਲੇ ਖਿੱਚ ਸਕਦੀ ਹੈ।

· ਪਾਈਪੇਟਿੰਗ ਹੈੱਡ ਨੂੰ ਸਾਹ ਰਾਹੀਂ ਅੰਦਰ ਖਿੱਚਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਨਮੂਨੇ, ਪਾਈਪ ਦੇ ਕਿਨਾਰੇ 'ਤੇ ਤਰਲ ਸਿਰ ਨੂੰ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਹਿਲਾਓ ਜਾਂ ਪੇਪਰ ਪੂੰਝੋ, ਬੂੰਦਾਂ ਦੇ ਬਾਹਰ ਤਰਲ ਚੂਸਣ ਵਾਲੇ ਸਿਰ ਨੂੰ ਪੂੰਝੋ। ਧਿਆਨ ਰੱਖੋ ਕਿ ਨਮੂਨਾ ਨਾ ਚੂਸੋ।

ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਨਮੂਨੇ ਵਾਲੇ ਛੇਕ ਵਿੱਚ ਰੱਖੋ।

· ਪਾਈਪੇਟਿੰਗ ਡਿਵਾਈਸ ਜਿਸ ਨਾਲ ਥੋੜ੍ਹਾ ਜਿਹਾ ਦਬਾਅ ਬਣਿਆ ਰਹੇ, ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਓਵਰਫਲੋ ਤਰਲ ਸਿਰ ਨੂੰ ਥੋੜ੍ਹਾ ਜਿਹਾ ਹਿਲਾਓ।
· ਬਫਰ ਵਿੱਚ ਪਾਇਆ ਗਿਆ ਪਾਈਪੇਟਿੰਗ ਹੈੱਡ, ਸਪਾਟ ਹੋਲਜ਼ ਤੋਂ ਥੋੜ੍ਹਾ ਉੱਚਾ, ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਦਬਾਅ ਬਣਾਈ ਰੱਖਦਾ ਹੈ। ਪਾਈਪੇਟ ਦੀ ਨੋਕ ਨੂੰ ਇੱਕ ਛੋਟੇ ਛੇਕ ਵਿੱਚ ਪਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
· ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਅਤੇ ਸਥਿਰ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਨਮੂਨੇ ਬਾਹਰ ਕੱਢੋ। ਪਾਈਪੇਟ ਦੀ ਨੋਕ ਬਿੰਦੂ ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਛੇਕ ਦੇ ਉੱਪਰ ਰੱਖੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਨਮੂਨਾ ਛੇਕ ਵਿੱਚ ਡੁੱਬ ਜਾਵੇਗਾ। ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਅੰਦਰ ਧੱਕਣ ਦੀ ਬਜਾਏ ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਛੇਕ ਨੂੰ ਭਰਨ ਲਈ ਡੁੱਬਣ ਦਿਓ।
· ਤਰਲ ਸਿਰ ਵਾਲੇ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਆਖਰੀ ਬੂੰਦ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਤਰਲ ਦੂਜੇ ਪੜਾਅ 'ਤੇ ਚਲੇ ਜਾਵੇਗਾ, ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਤਰਲ ਮੂਵ ਨੂੰ ਉੱਚਾ ਕਰੇਗਾ, ਬਫਰ ਤੋਂ ਬਾਹਰ ਚਲੇ ਜਾਵੇਗਾ।

ਵਰਟੀਕਲ ਗੂੰਦ ਸੈਂਪਲਿੰਗ ਕਿਵੇਂ ਕਰੀਏ?

· ਕੱਚ ਦੇ ਦੋ ਟੁਕੜਿਆਂ ਵਿਚਕਾਰ ਬਣੇ ਲੰਬਕਾਰੀ ਗੂੰਦ ਬਿੰਦੂ ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਛੇਕ। ਬਹੁਤ ਪਤਲੇ ਗੂੰਦ ਵਿੱਚ, ਪਾਈਪੇਟ ਸਿਰ ਨੂੰ ਦੋ ਕੱਚ ਦੀਆਂ ਪਲੇਟਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਵੀ ਨਹੀਂ ਪਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ। ਗਲਿਸਰੀਨ ਦਾ ਧਿਆਨ ਰੱਖੋ! ਪਾਈਪੇਟ ਸਿਰ ਨੂੰ ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਛੇਕ ਉੱਤੇ ਰੱਖੋ ਅਤੇ ਨਮੂਨਾ ਛੇਕ ਵਿੱਚ ਡੁੱਬ ਜਾਵੇਗਾ।
· ਨਮੂਨਾ ਦੇਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ, ਪੌਲੀਪ੍ਰੋਪਾਈਲੀਨ ਐਸਾਈਲ ਜੈੱਲ ਦੇ ਵਰਟੀਕਲ ਪੁਆਇੰਟ ਨੂੰ ਸਾਫ਼ ਕਰਨਾ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਓ। ਪੋਲੀਮਰਾਈਜ਼ਡ ਐਕਰੀਲਾਮਾਈਡ ਅਤੇ ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਛੇਕ ਦੇ ਤਲ 'ਤੇ ਦਿਖਾਈ ਦੇਣ ਵਾਲੇ ਪਾਣੀ ਨੂੰ ਧੋਵੋ। ਪਾਣੀ ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਛੇਕ ਨੂੰ ਕਾਫ਼ੀ ਛੋਟਾ ਬਣਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। 25 ਮਿ.ਲੀ. ਜਾਂ 50 ਮਿ.ਲੀ. ਸਰਿੰਜ ਅਤੇ 18-ਗੇਜ ਸੂਈ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ। ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਬਫਰ ਵਿੱਚ ਡੋਲ੍ਹ ਦਿਓ ਅਤੇ ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਛੇਕ ਨੂੰ ਧਿਆਨ ਨਾਲ ਫਲੱਸ਼ ਕਰੋ।
· ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਛੇਕ ਨੂੰ ਦੇਖਣਾ ਮੁਸ਼ਕਲ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਇਸਦੇ ਨਾਲ ਹੀ, ਬਾਕੀ ਸਭ ਆਸਾਨ ਹੈ। ਜੇਕਰ ਵਾਧੂ ਛੇਕ ਹਨ, ਤਾਂ ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਬਫਰ ਦੀ ਜਾਂਚ ਬ੍ਰੋਮੋਫੇਨੋਲ ਨੀਲੇ ਨਾਲ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।